Ponadto korki Matrigel zawierające komórki tuczne i komórki plazmocytomy wydają się być znacznie bardziej komórkowe niż czopki zaszczepione każdym rodzajem komórek. Stosowanie barwienia immunohistochemicznego myszy. lekki łańcuch (komórki TEPC2027 wydzielają łańcuchy a), liczne komórki plazmacytoma, często w grupach, zidentyfikowano w zatyczkach zawierających komórki tuczne plus komórki plazmacytoma, ale mniej, rozproszonych komórek pozytywnych zidentyfikowano we wtykach zawierających same komórki plazmacytomy (Figura 2A). Analiza ilościowa potwierdziła obecność istotnie (P <0,05) większej liczby komórek plazmocytomy we wtykach zawierających komórki tuczne plus komórki plazmacytoma w porównaniu z wtyczkami z samymi komórkami plazmocytomy (Figura 2B, dół). Porównywalne wyniki uzyskano dla SPMC (nie pokazano) i z BMMC w połączeniu z komórkami plazmacytoma TEPC1165SZ (nie pokazano). Rycina 2 Wpływ komórek tucznych i komórek plazmocytomy na angiogenezę in vivo. Myszy BALB / c nu / nu (3. 5 myszy na grupę) zaszczepiono sc Matrigelem (0,5 ml) w połączeniu z BMMC (0,5 x 106), TEPC2027 komórek plazmatycznych (0,5 x 106) lub BMMC plus komórki TEPC2027 (0,5 × 106 każdy). Wtyczki Matrigel, usunięte po 7 dniach, zostały przetworzone do badania histologicznego. (A) Górny rząd: Reprezentatywne obrazy histologiczne zatyczek Matrigel wybarwionych trichromem Massona. Dolny rząd: Reprezentatywne histologiczne obrazy wtyczek Matrigel, które zostały wybarwione immunologicznie. lekki łańcuch. Oryginalne powiększenie, × 20. (B) Ilościowa analiza neowaskularyzacji (u góry) i infiltracji komórek plazmocytoma (u dołu) we wszystkich wtykach Matrigel (3 × 5 wtyczek w grupie, wtyczka na zwierzę). Neowaskularyzację mierzono jako obszary zajmowane przez struktury naczyniowe i wyrażano jako średnią powierzchnię (. SD pomiarów z poszczególnych czopków w każdej grupie) zajmowaną przez struktury naczyniowe w każdej grupie. Infiltrację komórek plazmacytoma mierzono przez zliczanie komórek plazmocytomy obecnych w każdej sekcji wtyku i wyrażano jako średnią liczbę komórek (. SD pomiarów w poszczególnych wtykach z każdej grupy). (C) Kolejne skrawki zawierające BMMC i komórki TEPC2027 były podwójnie wybarwione błękitem toluidyny i Tie-2 / Fc lub kontrolnym Fc. Komórki tuczne, purpurowe z powodu błękitu toluidynowego i brązowego z powodu Tie-2 / Fc (ale nie kontrolujące Fc), lokalizują się w pobliżu naczynia. Oryginalne powiększenie, × 40. Komórki tuczne zidentyfikowane we wtykach poprzez barwienie cytochemiczne błękitem toluidyny (fioletowym), zlokalizowane głównie w pobliżu nowo utworzonych naczyń (ryc. 2C). Co ważne, komórki pozytywne wobec toluidyny eksprymowały Ang-1, ponieważ specyficznie wybarwiały Tie-2 / Fc (brązowy), ale nie kontrolowały Fc (Figura 2C). Wyniki te pokazują, że w obecności komórek plazmocytom komórki tuczne mogą promować neowaskularyzację i wzrost lub przeżycie komórek plazmacytoma in vivo. Udział Ang-1 w angiogenezie indukowanej przez komórki tuczne. Aby sprawdzić, czy Ang-1 przyczynia się do zwiększonej angiogenezy indukowanej przez komórki tuczne, wykorzystaliśmy rekombinowane białko fuzyjne Tie-2 / Fc do neutralizacji Ang-1 z lub bez neutralizujących przeciwciał przeciwko VEGF-A (Figura 3). Jak zaobserwowano powyżej, korki Matrigel zawierające zarówno BMMC, jak i TEPC2027 sam (bez dodatków) zawierały liczne struktury naczyniowe i skupiska komórek P z chromosomem plazmidowym (Figura 3, A i B). Indywidualnie, przeciwciała neutralizujące skierowane na VEGF-A i Tie-2 / Fc częściowo zmniejszały obszar zajmowany przez struktury naczyniowe (Figura 3B, góra, P = 0,15, przeciwciało anty-VEGF-A, P = 0,02, Tie-2 / Fc) oraz liczba komórek plazmacytomowych we wtykach (Figura 3B, dół, P <0,05, oba warunki). Razem, Tie-2 / Fc. oraz przeciwciała neutralizujące VEGF-A (3 znacznie zmniejszały obszar zajmowany przez struktury naczyniowe (P <0,001) i liczbę komórek plazmacytoma we wtykach (P <0,001). Oba parametry były tylko minimalnie zmienione (P> 0,1) przez odczynniki kontrolne (B7-1 / Fc w połączeniu z przeciwciałem kontrolnym, Figura 3B); dostarczyło to dowodów na proangiogenną rolę Ang-1 pochodzącego z komórki tucznej. Aby to dokładniej zbadać, użyliśmy rekombinowanego Ang-1. Jak pokazano na ryc. 3, C i D, czopy Matrigel zawierające rekombinowaną Ang-1 wraz z komórkami plazmocytomy wykazywały dowody na zwiększoną neowaskularyzację i naciek komórek plazmacytoma w porównaniu z czopami Matrigel zaszczepionymi samymi komórkami plazmocytomy (P <0,05, oba porównania). Istotnie, rozszerzone struktury naczyniowe zaznaczone w Ang-1 plus komórki plazmocytomy przypominały morfologicznie struktury pochodzące z inokulacji komórek tucznych komórkami plazmocytomy (Figura 3A). Monocyty i makrofagi były rzadko identyfikowane przez barwienie esterazy cytochemicznej w czopach Matrigel z lub bez Ang-1 (nie pokazano) [podobne: toaleta drzewa oskrzelowego, publiczny bank krwi pępowinowej, trening funkcjonalny książka ] [patrz też: lekarz medycyny pracy opole, toaleta drzewa oskrzelowego, dieta dla cukrzyków typu 2 jadłospis ]
